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　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了動(dòng)物急性吸入毒性試臉的試驗(yàn)?zāi)康?、定義、試驗(yàn)基本原則、試驗(yàn)方法。

 

　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于評(píng)價(jià)氣體、揮發(fā)性物質(zhì)或氣溶膠／顆粒物等化學(xué)品的急性吸入毒性作用。

 

 

　　在規(guī)定時(shí)間內(nèi)，各試驗(yàn)組動(dòng)物吸入濃度不同的受試樣品，可以通過(guò)預(yù)試驗(yàn)來(lái)選擇染毒濃度。檢測(cè)毒物對(duì)動(dòng)物的毒性反應(yīng)及死亡情況。在試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物將被驗(yàn)尸，而試驗(yàn)結(jié)束時(shí)還活著的動(dòng)物要處死并進(jìn)行大體解剖。

 

 

 

　　健康成年小鼠（18g~22g）或大鼠(180g~220g)，也可選用其他敏感動(dòng)物。同性別各劑量組個(gè)體間體重相差不超過(guò)平均體重的20％。在試驗(yàn)前，在試驗(yàn)環(huán)境下，動(dòng)物要不低于適應(yīng)3d~5d時(shí)間。

 

 

　　根據(jù)所選方法的要求，原則上應(yīng)設(shè)4~5個(gè)劑量組，每組動(dòng)物一般為10只，雌雄各半。各劑量組距離大小用受試物毒性大小與動(dòng)物死亡為宜，一般把組距大、動(dòng)物數(shù)量少進(jìn)行預(yù)試。若受試樣品毒性很小，也可使用20只動(dòng)物（雌雄各半）的一次限量法。一般2000mg/m3，吸入4h，如未引起動(dòng)物死亡，急性吸入毒性試驗(yàn)就不再進(jìn)行多個(gè)劑量。需要時(shí)也可做5000mg/m3，或更高濃度吸入4h，或以可能發(fā)生的濃度進(jìn)行試驗(yàn)。

 

 

　　染毒可采用靜式染毒法或動(dòng)式染毒法。

 

 

　　靜式染毒是把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物放在規(guī)定體積的密閉容器（染毒柜）中，加入一定量的受試樣品，并使其揮發(fā)，造成試驗(yàn)需要的受試樣品濃度的空氣，一次吸人性染毒2h或4h。

 

　　4. 3.1.1染毒柜的容積以每只染毒小鼠每小時(shí)不少于3L空氣計(jì)，每只大鼠每小時(shí)多于30L計(jì)。

 

　　4. 3.1.2染毒濃度的計(jì)算：染毒濃度一般應(yīng)采用實(shí)際側(cè)定濃度。在染毒期間一般可測(cè)4~5次，求其平均濃度。在無(wú)適當(dāng)側(cè)試方法時(shí)?？捎檬剑?）計(jì)算染毒濃度：

 

　　c=（a×d/V) ×106· · ·· · ·· · ·· · ·· · ·· · ·· · ·· · ·· ·（1)式中：

 

　　c——染毒濃度，單位為毫克每立方米（mg/m3);

 

　　a——加入受試樣品的量，單位為毫升（mL);

 

　　d——化學(xué)品相對(duì)密度;

 

　　V——染毒柜容積，單位為升（L）。

　　4. 3.2動(dòng)式染毒法

 

　　動(dòng)式染毒是采用機(jī)械通風(fēng)裝置，把含有一定濃度受試樣品的空氣連續(xù)、均勻不斷地送入染毒柜，空氣交換量大約為12次／h~15次／h，并排出等量的染毒氣體，保持相對(duì)固定的染毒濃度（對(duì)通過(guò)染毒柜的流動(dòng)氣體應(yīng)不間斷地進(jìn)行監(jiān)側(cè)，并至少記錄2次）。

 

　　一次吸入性染毒2h。如果受試化合物有特殊要求，那就應(yīng)該采用其他的氣流速率。染毒時(shí)，染毒柜中至少要保證19％的氧含量與均衡分配的染毒氣體。

 

　　一般而言，為保證染毒柜內(nèi)空氣穩(wěn)定，試驗(yàn)動(dòng)物的體積必須小于染毒柜體積的5％。且染毒柜內(nèi)要保持徽弱的負(fù)壓，避免受試樣品泄露對(duì)周圍環(huán)境造成污染。與此同時(shí)，要注意避免受試樣品爆炸。

 

　　4. 3.2.1受試樣品氣化（霧化）和輸入的常用方法

 

　　4. 3.2.1.1氣體受試樣品，經(jīng)流量統(tǒng)計(jì)與空氣混合成一定濃度后，直接輸入染毒柜。

 

　　4. 3.2.1.2易揮發(fā)液體受試樣品，揮發(fā)后，通過(guò)空氣鼓泡或適當(dāng)加熱促使輸入染毒柜。

 

　　4. 3.2.1.3若受試樣品現(xiàn)場(chǎng)使用時(shí)采取噴霧法時(shí)，可以用噴霧器或超聲霧化器來(lái)讓它霧化為氣溶膠，然后輸入染毒柜。

 

　　4. 3.2.2染毒濃度計(jì)算

 

　　一般情況下，染毒濃度應(yīng)采用動(dòng)物呼吸帶實(shí)際側(cè)定濃度，不低于每半小時(shí)一次，取其平均值。各側(cè)定濃度值應(yīng)在其平均值的25％以內(nèi)。若無(wú)適當(dāng)?shù)膫?cè)試方法，也可采用式（2）計(jì)算染毒濃度：

 

　　c= [a×d/（V1+ V2) ] ×106· · ·· · ···· · ··· ·· · ·（2)式中：

 

　　c——染毒濃度，單位為毫克每立方米（mg/m3);

 

　　a——氣化或霧化受試樣品的量，單位為毫升（mL);

 

　　d——受試樣品相對(duì)密度;

 

　　V1——輸入染毒柜風(fēng)量，單位為升（L）。

 

　　V2——染毒柜容積，單位為升（L）。

 

 

　　4. 4.1 觀察并記錄染毒過(guò)程和觀察期內(nèi)的動(dòng)物中毒和死亡情況。觀察期限一般為14d。

 

　　4. 4.2 對(duì)死亡動(dòng)物進(jìn)行尸檢。觀察期結(jié)束后，處死存活動(dòng)物并進(jìn)行大體解剖，必耍時(shí)，進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

 

 

　　當(dāng)評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，LC50應(yīng)結(jié)合觀察到的毒性效應(yīng)及尸檢所見(jiàn)考慮，LC50值是受試樣品急性毒性分級(jí)和標(biāo)識(shí)以及判定受試樣品經(jīng)呼吸道吸入后引起動(dòng)物死亡可能性大小的依據(jù)。引用LC50值時(shí)一定要注明所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、性別、染毒方式及時(shí)間長(zhǎng)短、觀察期限。

 

　　評(píng)價(jià)應(yīng)包括動(dòng)物接觸受試樣品與動(dòng)物異常表現(xiàn)（包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應(yīng)及其他毒性作用）的發(fā)生率和嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。

 

　　以上就是關(guān)于動(dòng)物急性吸入毒性試驗(yàn)方法的介紹，希望對(duì)大家有所幫助。

 

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